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科普知识
酶底物法测定水中大肠菌群
添加时间:2018-09-03
  酶底物法(Defined Substrate Technology,DST)是指在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶,(β-D-galactosidase)的细菌群组能分解色原底物释放出色原体是培养基呈颜色变化,以此技术来检测水中大肠菌群的方法。该方法在全球广泛的被使用在检测水中粪大肠杆菌及总大肠菌群。
立科固定没酶底物法产品经过多年研发,全球使用广泛的测试方法,中华人名共和国国家标准检测方法,被国内多家供水公司、疾病预防控制中心、环境检测中心及水文站全面使用。
本文采用立科酶底物法检测大肠菌群,结果表明该方法的特异性强,时间周期短,数据准确,
二次污染小、简便快速,适用推广应用。
1、立科酶底物法简介
Colitech酶底物法试剂采用GB/T5750.12-2006中固定底物技术(Defined Subsrate Technology,DST)的Minimal Medium ONPG-MUG(MMO-MUG)培养基,当Colitech酶底物法检测试剂加入含有总大肠菌群细菌组的水样,目标细菌在含有固定底物ONPG-MUG的培养基中繁殖,大肠菌群细菌组产生的特异性生物酶β-半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的固定色原底物ONPG,使培养基呈现黄色反应,同时水样中大肠埃希氏菌产生特异性B-葡萄糖苷酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培养基中的固定荧光底物MUG,产生特征性蓝色荧光。因而可以定性检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌。当水样中少数非目标细菌的生物酶试图和OPNG或MUG,产生特征性蓝色荧光。
因而可以定性检测水中大肠菌群和大肠埃希氏菌。当水样中少数非目标细菌的生物酶试图和
ONPG或MUG反应,干扰检测结果时,colitech培养基中特殊配方的基质会抑制其反应过程,控制假阳性的产生;同时,这些特殊培养基质可以有效促使目标细菌的生物酶和固定底物反应,所以假阴性发生率比传统方法更低。Colitech酶底物法检测试剂为符合《生活饮用水标准检测方法》的培养基。Colitech和51或97孔定量检测盘联合使用,可以定量检测100毫升水样中0~200个或0~2419个目标细菌,而不要稀释。
 
2、酶底物法仪器与试剂
仪器
培养箱(36±1℃),高压蒸汽灭菌器,定量盘(51孔和91孔),程控定量封口机,试管,稀释瓶,移液管,量筒。
试剂
立科colitech酶底物法检测试剂,灭菌稀释水。
 
3、酶底物法检测步骤
3.1水样稀释
检测所需水样为100ml。若水样污染严重时可进行稀释,取10ml水样加入到90ml灭菌稀释水中,必要时要加大稀释度。本实验室取20个水样分别进行总大肠菌群(1-10)和粪大肠菌群(11-20)检测。
3.2定性试验
用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样,加入立科培养基,摇晃至溶解,36±1℃培养24小时。
3.3定量试验
用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样,加入立科培养基,摇床至溶解,将该溶液导入51孔(总大肠菌群)或97孔(粪大肠菌群)定量盘内,将定量盘放入程控定量封口机封口,36±1℃培养24小时。
结果报告
定性反应
将水样培养24h后进行结果判读,如颜色变成黄色,判断为阳性反应,表示水中含有大肠菌群,若水样未发生颜色变化,判断为阴性反应,表示水样中不含大肠菌群。定性结果以大肠菌群检出货未检出报告。结果见表1。
表1定性反应结果
水样编号 反应结果 水样编号 水源水样
1 11
2 12
3 13
4 14
5 15
6 16
7 17
8 18
9 19
10 20
 
 
定量反应
将培养24h的定量盘内水样进行结果判读,如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中含有大肠菌群,几乎有黄色反应的孔穴数,总大肠菌群对照51孔定量盘法不同阳性结果的最可能数(MPN)及95%可信范围表,粪大肠菌群对照97孔定量盘法不同阳性结果的MPN值查出其代表的大肠菌群最可能数(MPN),结果以MPN/L报告,如果所有孔均未产生黄色,以未检出报告。结果见表2.3。
表2总大肠菌群定量反应结果(51孔)
水样编号 阳性孔数 MPN/L
1 6 64
2 15 178
3 0 <10
4 0 <10
5 3 21
6 0 <10
7 0 <10
8 1 10
9 22 288
10 16 192
 
 
表3粪大肠菌群定量反应结果(97孔)
水样编号 阳性孔数(大孔) 阳性孔数(小孔) 稀释倍数 MPN/L
1 38 21 100 1.17×103
2 25 16 100 5.73×104
3 19 14 50 8.32×103
4 0 0 - <10
5 36 20 1000 1.03×105
6 19 2 1000 2.43×105
7 0 0 - <10
8 49 26 1000 4.88×106
9 48 28 10000 3.97×107
10 42 25 - 1.64×103
 
 
结语
本实验采用酶底物法检测水样中大肠菌群,无需制备培养基,只需独立包装立科培养基溶解后,即可使用。检测每个样品只需简单5步即可,操作简单,快捷,实际手工操作的时间只需两分钟,无需在无菌室内操作,结果准确减少假阳性反应与假阴性反应,判读容易,满足GB5749-2006生活饮用水标准和GB8978-1996污水综合排放标准?捎τ糜谠此,瓶装水,饮用水,畜牧用水,废水,再生水,食品水,医疗用水等各样水样,可以很好的用于突发事件应急。
 
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